FLOW CELL CYTOMETRY COMPENSATION

Yazar: | 24 Mayıs 2015

                                    FLOW CELL CYTOMETRY COMPENSATION

  1. Unlabelled boncuk (BD-comp beads beyaz kapaklı tüp) PMT voltaj ayarlarını yapmak için

 

  1. İmmunglobulin kappa içeren boncuk (BD-comp beads mavi kapaklı tüp-antikor bağlanma bölgesi içerir)

Deneyde kullanılacak olan antikorlar ile  ayrı ayrı muamale edilir

 

BOYALARIN HAZIRLANMASI

1.tüp: sadece unlabelled boncuk (beyaz kapaklı tüp)  (bir damla)

2.tüp: unlabelled  boncuk (bir damla) – IgK (bir damla) – kullanılacak antikor (deney miktarı ile aynı)

3.tüp: unlabelled  boncuk (bir damla) – IgK (bir damla) – kullanılacak  diğer antikor (deney miktarı)

 

Kullanılmayan parametreleri sil

Experiment

                                     Compensation set-up

Create compensation control

Browser bölümünde çalışma dosyaları çıkmalı

Kaç parametre seçilirse bir fazla tüp çalışma tüpü oluşur

Grid oluşturulmalı (tabloların tamamı shift ile seçilmeli)

LOAD

FSC/SSC (PMT voltaj değerlerini) düzenle

Voltaj değerleri ile oynamak için ‘paramer’ kutusu açık olmalı

RECORD

Record tamamlanınca unload denir

 

BOYALARIN HAZIRLANMASI

Comp beads: iki tüp; biri negatif kontrol diğeri ise Ig K (antikor bağlanma bölgesi içerir)

1.tüp: sadece unlabelled boncuk (beyaz kapaklı tüp)  (bir damla)

2.tüp: unlabelled  boncuk (bir damla) – IgK (bir damla) – kullanılacak antikor (miktar ?)

3.tüp: unlabelled  boncuk (bir damla) – IgK (bir damla) – kullanılacak  diğer antikor (miktar ?)

Anti-mouse immunglobulin kappa: antikor bağlanma bölgesi vardır ve herhangi bir antikor ile bağlanabilir.

Antikor işlemlerinde ışıklı ortamdan kaçınılmalıdır ve antikor eklendikten sonra işlemler hızlıca yapılmalıdır.

Antikor ilavesinden sonra ve sıvı eklendikten sonra, inkübasyon işlemlerinden sonra vortex yapılmalı (bu işlem önemlidir)

Hazırlanan tüpleri vortex yap (medium-5 seconds)

İnkübasyon (karanlık, oda sıcaklığı, 20 dakika)

İnkübasyondan sonra vortex yap

1 ml cell wash ekle

Santrifüj (1200 rpm, 5 dakika,  RT )

Santrifüj sonunda pelet gözükmeyecek, süpernatanı uzaklaştırırken pastör pipet kullan tamamen tüpün dibine kadar girme, her tüp için yeni pipet kullan kontaminasyona dikkat et

Vortex

500 Cell wash ekle (okutmak için eklenir, miktar değişebilir)

 

 

Bir Cevap Yazın

E-posta hesabınız yayımlanmayacak. Gerekli alanlar * ile işaretlenmişlerdir